1．撤血试验
①孕酮撤血试验：撤药后出血者，提示病变在下丘脑-垂体；
②雌激素撤血试验：撤药后无出血者，提示病变部位在子宫。
2．卵巢功能的测定
测定卵巢功能的方法有：基础体温、子宫颈粘液检查、阴道脱落细胞涂片，测定血、尿中雌激素和孕激素水平等。
通过卵巢功能的测定可以鉴别闭经的原因是在靶器官或在卵巢或卵巢以上的某个环节。当卵巢有排卵功能时其闭经原因不在卵巢而可能在子宫或阴道，从而排除垂体性闭经。了解卵巢功能有助于指导用药。
3．垂体功能测定
临床上FSH增高的意义较大，如FSH高于40IU/L提示卵巢功能已衰竭。如LH低于51U/L表示促性腺激素功能不足。若FSH和LH都降低，常提示垂体更高中枢功能低落。24小时尿FSH的排出量大于52．8小白鼠子宫单位，则病因在卵巢。血清PRL测定，本征约有20％的病人有高泌乳素血症存在。
4．黄体生成激素释放激素（LRH）兴奋试验
测垂体对下丘脑LRH的反应。如果反应在基数的3倍左右者说明垂体功能正常而病因在下丘脑。基数低、反应差或无反应者，病因在垂体。其中部分是由于垂体在长期抑制状态下出现的惰性反应。故一次注射LRH无反应或反应迟钝，必须重复试验，经多次试验均无反应时，才有较大的临床意义。
5．其他诊断措施
如颅内蝶鞍区摄片、CT扫描及核磁共振以及眼底检查等，以摒除垂体肿瘤；24小时尿17-OHCS、17-KS测定和甲状腺功能测定等；腹腔镜检查，可直接观察子宫、输卵管和卵巢的形态与病变情况。
